牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析

【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。     

浙江天童常绿阔叶林中马尾松菌根研究

通过对浙江天童常绿阔叶林中马尾松的菌根研究,比较分析了马尾松在不同样地及不同季节菌根感染率的状况,结果表明,菌根感染率与季节及样地类型有密切的联系,12月份左右,在裸地中菌根感染率较低,只有2.67%;而7月份左右,在马尾松林中,菌根感染率达到了76%.其次,通过一年多对各样地子实体的采集研究和实验室分析,确定在这个阔叶林中与马尾松共生的菌根真菌共4科6属8种,其中硬皮马勃科（Scleroderrnataceae）豆马勃属（Pisolithus）的彩色豆马勃（P.tinctorius（Pers.））和大包硬皮马勃（S.bovista Fr.）以及红菇科（Russulacese）乳菇属（Lactarius Dcex Gray）的松乳菇（L.deliciosus（L.ex.Fr）Gery）分布较广泛,在多数样地中均可找到相应的子实体.最后,本文通过菌根在生态系统中的作用,初步探讨了菌根与常绿阔叶林整体退化机制之间的关系.     

湖南林业综合行政执法改革试点研究报告

2004年3月,根据国家林业局的部署,湖南省在会同县进行了“现有的资源林政执法队伍明确为林业综合行政执法机构”试点。重点对林业综合行政执法的发展前景及实施综合行政执法对林业主管部门行政管理体制改革的影响,进行了探索和研究。调研表明:林业综合执法势在必行,它能够排解现行林业行政执法体系中存在的问题,缓解林业执法体系中传统惯性大、磨合期长的不利因素。     

四川悬钩子属植物资源调查分析

研究了四川悬钩子属植物种类、分布、生态环境、生物学、繁殖特性等；已鉴定悬钩子属有28种7变种，其中光滑高梁泡、川莓、山莓、插田泡、红泡刺藤等分布广泛；繁殖方式有根蘖、种子、顶端生根和匍匐茎繁殖；并根据悬钩子的经济性状和用途进行了分类。     

三倍体毛白杨引种试验初报

三倍体毛白杨具有生长迅速、抗逆性强、材质优良等特性，在北方广为种植，是当前最有开发价值的10大杨树新品种之一。首次在江西开展引种栽培试验，当年平均苗高3．5m，平均地径3．2cm，病虫危害少，苗期生长基本正常。初步显示，三倍体毛白杨在江西也能引种栽培。     

湖北薤山自然保护区两栖爬行动物多样性调查

2005年8月对湖北省薤山自然保护区的两栖动物和爬行动物进行了专项调查.分别记录到两栖动物21种,隶属于2目8科;爬行动物31种,隶属于2目9科.对它们的物种组成、地理区系特点和保护等级进行了研究,并提出了保护建议.     

云南野生花卉数据库的建立及应用

通过对众多的野外调查材料和有关文献资料的收集分析、整理,运用计算机软件建立了云南野生花卉数据库,为云南花卉资源的查询、生物多样性保护提供了有力的信息支持。在论述云南野生花卉数据库的建库目的、意义之后,对该数据库的结构及其数据查询、统计、报表打印、图片处理等功能作了详尽介绍,并评述了云南野生花卉数据库的应用价值。     

禁牧对退化草地恢复的作用

草地是我国重要的农业自然资源之一,但目前草地退化的现象十分严重,超载过牧是主要原因之一。本文就针对草地退化提出的围封禁牧措施对草地植被、土壤及草地生态系统恢复过程中的作用进行综述,发现适度放牧对草地恢复是必需的,但采取长期围封禁牧恢复与重建草地的做法不可取,围栏封育并非恢复退化草地的万全之计。建议在我国要因地制宜,根据草地的退化程度,采取合理的划区轮牧强度和放牧时间,与退化草地生态恢复的围封措施结合,以达到既能恢复退化草地,又可收获畜产品的双赢目的,实现草地生态系统持续平衡发展的目标。     

膜下滴灌水氮空间调控对机采棉群体塑造及产量的影响

【目的】研究膜下滴灌水氮空间调控对机采棉群体塑造及产量的影响。【方法】以新陆中66号为供试品种,试验采用大田裂区试验设计,主区为膜内不同滴灌带条数,分别为2、3和5条（分别标记为G₂、G₃、G₅）;副区为不同施氮量,分布为0、238、317、396 kg/hm²（分别标记为N₀、N₁、N₂、N₃）,研究棉花生育期内不同水氮处理对群体指标、叶面积指数、干物质积累、产量和氮肥农学效应的影响。【结果】施氮量对机采棉群体塑造影响极显著,滴灌带布置条数对茎粗和果枝始节高度有显著影响;增加布管数量和施氮量可增加机采棉的叶面积指数,并在生育中后期达到显著影响;机采棉地上部分干物质积累量、单株铃数、单铃重、衣分和籽棉产量均随着施氮量的增加而呈单峰趋势,在N₂水平下有最大值;滴灌带条数和施氮量的交互作用对果枝始节果枝始节高度、吐絮初期干物质积累量和产量的影响显著。【结论】水氮空间调控会显著影响棉花群体塑造和产量。适合“10 cm-66 cm-10 cm-66 cm-10 cm”机采棉模式的水氮组合为G₅N₂;考虑种植成本,也可选用G₃N₂组合,但需要适当提高其灌水频率,并对应减少灌水定额。     

1-MCP结合低温通过调控脆性、叶绿素降解缓解叶类蔬菜采后衰老

为探究1-MCP结合低温通过调控影响品质变化的相关酶来缓解叶类蔬菜采后软化与黄化。分析4 ℃及4、6 μL/L 1-MCP+ 4 　℃复合处理2种叶菜（生菜和瓢儿菜）后,其失水率、膜透性（电导率、丙二醛（MDA）、脆性［脆性、β-半乳糖苷酶（β-GAL）酶活性］、黄化程度［叶绿素、叶绿素酶（CLH）酶含量、脱镁叶绿素酶（PPH）酶含量］的变化。结果表明：常温下2种叶菜贮藏4 d后严重萎蔫失去商业价值,1-MCP+4 　℃保鲜处理后能贮藏至12 d,1-MCP+4 　℃复合处理能有效地降低叶类蔬菜水分散失程度、缓解电导率和MDA升高、缓解叶片脆度降低和叶绿素降解,其中6 μL/L 1-MCP+4 　℃复合处理效果最为理想。6 μL/L 1-MCP+4 　℃复合处理12 d时生菜、瓢儿菜的脆性下降率（14.48%、28.12%）均比对照组4 d时（82.89%、80.12%）低,其β-GAL酶活性分别为15.01 nmol/（min·g）、19.53 nmol/（min·g）,分别上升41.86%、12.74%,而对照组仅4 d就上升2倍左右。贮藏12 d时,6 μL/L 1-MCP+4 　℃复合处理两种叶菜叶绿素含量降解率（23.45%、30.13%）低于第4天时对照组（65.76%、72.37%）。相关的酶活含量数据也正好对应,6 μL/L 1-MCP+4 　℃复合处理生菜贮藏12 d后其CLH、PPH酶含量分别降低42.33%、67.11%,常温贮藏4 d后其CLH、PPH酶含量分别降低55.99%、74.50%。6 μL/L 1-MCP+4 　℃复合处理瓢儿菜后其CLH、PPH酶含量分别降低44.93%、51.49%,常温贮藏4 d后其CLH、PPH酶活则降低53.03%、52.04%。6 μL/L 1-MCP+4 　℃通过有效调控β-GAL酶活性从而延缓叶菜软化的速度,通过影响CLH和PPH酶含量而缓解叶绿素降解,这为探索叶类蔬菜的保鲜机制,进一步利用采后处理技术延长叶类蔬菜贮藏期提供理论依据。